MEME KANSERİ HÜCRELERİNDE MİRİSETİNİN KEMOTERAPİ DUYARLILIĞI ÜZERİNE ETKİSİ

Abstract

ÖZET

Bu çalışmada meme kanseri hücrelerinde mirisetinin kemoterapi duyarlılığı üzerine etkileri araştırılmıştır. Bu araştırma yapılırken mirisetinin, doxorubisinin ve kombine uygulamalarının değişen dozlarda MCF-7 hücrelerine uygulanıp doza ve zamana bağımlı olarak hücre canlılığının tespiti ve hücrelerin %50’sinin yaşadığı dozu bulmak için XTT hücre proliferasyon testi kullanılmıştır. Gen düzeyinde ekspresyon değerlendirmesi yapabilmek amacı ile kontrol ve doz gruplarında RNA izolasyonu TrizolReagent ile gerçekleştirilmiştir. İzole edilen RNA’nın konsantrasyonu ve saflığı Nanodrop cihazıyla gerçekleştirilmiştir. İzole edilen total RNA’lardan PT-PCR öncesi cDNA sentezi AppliedBiosystems High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit ile 96 well plakalar kullanılarak StepOne Plus Real-Time PCR cihazıyla gerçekleştirilmiştir. MCF-7 hücre hattında kontrole göre BAX, BCL-2, MDR-1 ve STAT3 genlerinin mRNA düzeyindeki ekspresyon değişimleri Real-Time PCR ile araştırılmıştır. PT-PCR yöntemi kullanılarak tespiti sağlanan mRNA ekspresyon değişimi sonucu elde edilen veriler ΔΔCT metodu ile analiz edilmiştir.

Yaptığımız çalışma sonucunda mirisetinin ve doxorubisinin MCF-7 hücrelerinde artan doza bağlı olarak hücre proliferasyonunu azalttığı tespit edilmiştir. Kombine uygulamalarda mirisetin ile doxorubisinin sinerjistik etki göstermediği tespit edilmiştir. Doxorubisinin kendi başına daha etkili olduğu belirlenmiştir. RT-PCR kapsamında STAT3, MDR-1, BAX ve BCL-2 genlerinin mRNA ekspresyon değişimleri araştırılmıştır. Doxorubisinin ve mirisetinin IC50 değeri ve kombine gruplarındaki gen ekspresyon değişimleri kontrol grubuna göre karşılaştırılmıştır. Özellikle STAT3 geni başta olmak üzere bazı gen ifadelerinde anlamlı değişimler tespit edişmiştir.

ABSTRACT

In this study, the effects of myricetin on chemotherapy sensitivity in breast cancer cells were investigated. During this research, myricetin, doxorubicin and their combined applications were applied to MCF-7 cells in varying doses, and cell proliferation test with XTT was used to determine the cell viability in a time and dose dependent manner and to find the dose at which 50% of the cells lived. In order to evaluate the expression at the gene level, RNA isolation was performed with Trizol Reagent in the control and dose groups. The concentration and purity of the isolated RNA were determined by Nanodrop. cDNA synthesis from isolated total RNAs before PT-PCR was performed with Applied Biosystems High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit and StepOne Plus Real-Time PCR device using 96 well plates. Expression of BAX, BCL-2, MDR-1 and STAT3 genes at the mRNA level in MCF-7 cell line compared to control were investigated by Real-Time PCR. Data was analysed according to the ΔΔCT method.

As a result of our study, it was determined that myricetin and doxorubicin decreased cell proliferation in MCF-7 cells depending on the increasing dose. It was determined that myricetin and doxorubicin did not show a synergistic effect in combined applications. It was determined that doxorubicin was more effective on its own. Within the scope of RT-PCR, mRNA expression changes of STAT3, MDR-1, BAX and BCL-2 genes were investigated. The IC50 value of doxorubicin and myricetin and the gene expression changes in the combined groups were compared with the control group. Significant changes were detected in some gene expressions, especially the STAT3 gene.