TESTİKÜLER TORSİYON/DETORSİYON HASARINA KARŞI PHOENİXİN’İN KORUYUCU ETKİSİNİN İNCELENMESİ

Abstract

ÖZET

Özellikle perinatal ve pubertal dönemlerde sık karşılaşılan klinik bir durum olan testiküler torsiyon, testis dokusunda hasara ve infertilitiye neden olabilmektedir. İskemik hasara karşı oldukça dayanıksız olan testis dokusunda hasarı en aza indirmek için erken tanı ve müdahale önem arz etmektedir. Phoenixin (PNX), üreme fonksiyonlarında rol oynadığı bilinen bir peptittir. Hem merkezi olarak hipotalamus’ta ve nucleus arcuatus’ta hem de periferik olarak kardiyak ve gastrointestinal dokularda eksprese edilen PNX, gonadotropin salgılatıcı hormon aracılığıyla üreme hormonlarının salgısını düzenlemektedir. Bu çalışmanın amacı; PNX’in testis dokusundaki oksidatif hasar, inflamatuvar yanıt ve serum testosteron seviyesi üzerine etkileri incelenmesidir. Ayrıca testis dokularında meydana gelebilecek histopatolojik değişikler üzerine PNX’in etkilerinin seminifer tübül çapı, epitel kalınlığı, bazal membran kalınlığı gibi histopatolojik özelliklerin de incelenmesi amaçlanmıştır.

Çalışmada, 48 adet erkek sıçan kullanıldı ve sıçanlar 4 gruba (Sham, TTD, TT+PNX+TD, TTD+PNX) (n=12) ayrıldı. Sham grubundaki sıçanlara sham testis torsiyon detorsiyon cerrahisi uygulanırken diğer üç gruptaki sıçanlara testis torsiyon detorsiyon cerrahisi uygulanacaktır. TT+PNX TD grubundaki sıçanlara torsiyonun 90. dakikasında, TTD+PNX grubundakilere de detorsiyon başlangıcında tek doz intraperitonel PNX (50 µg/kg) uygulandı. Sham ve TTD gruplarındaki sıçanlara herhangi bir enjeksiyon uygulanmadı. Detorsiyondan 24 saat sonra tüm gruplardaki sıçanlar dekapite edilerek kan ve testis dokusu örnekleri alındı. Alınan kan örneklerinden serum testosteron seviyeleri ELISA yöntemiyle belirlendi. Doku örneklerin oksidatif hasarı belirlemek için SOD, MDA, TAS ve TOS düzeyleri; inflamatuvar hasarı belirlemek için ise TNF-α ve IL-6 düzeyleri belirlendi. Ayrıca testis dokusunda iskemi sonrası meydana gelebilecek histopatolojik değişiklikler rutin Periyodik Asit Schiff (PAS) boyama yöntemiyle ve immünohistokimyasal yöntemler ile incelendi. İmmünohistokimyasal analizler kapsamında spermatogonyum kök hücreleri, Sertoli hücreleri, Leydig hücreleri spesifik antikorlarla boyanıp hücre sayımı yapıldı ve gruplar arasında karşılaştırıldı.

TTD grubunda testis dokusunda SOD enzim aktivitesi ve TAS seviyesinin sham grubuna göre belirgin derecede azalmış olduğu görüldü (p<0.05). Bunun yanı sıra testis dokusunda torsiyon detorsiyon hasarına bağlı olarak MDA, TOS, TNF-α ve IL-6 seviyelerinde belirgin bir artış görüldü (p<0.05). PNX uygulanan gruplarda ise uygulama zamanından bağımsız olarak SOD enzim aktivitesi ve TAS seviyesinde istatistiksel olarak anlamlı bir artış belirlendi (p<0.05). Diğer taraftan PNX uygulamasının torsiyon detorsiyon hasarına bağlı olarak artan MDA, TOS, TNF-α ve IL-6 seviyelerinde azalım meydana getirdiği tespit edildi (p<0.05). Yapılan histomorfolik analizler sonucunda PNX uygulanan gruplarda seminifer tübül çapı ve epitel kalınlığı TTD grubuna göre anlamlı derecede artmış bulunurken (p<0,05) sham grubuna göre benzer bulundu (p>0,05). Spermatogonia sayısı TTD grubunda sham grubuna göre anlamlı derecede azalmış bulundu (p<0,05). PNX uygulanan gruplarda ise TTD grubuna göre artış gözlenirken (p<0,05), sham grubuna göre benzer bulundu (p>0,05). Spermatogonia sayımı yapılan tübüllerin çap ölçümleri de daha önceki seminifer tübül ölçümlerinde olduğu gibi TTD grubunda diğer gruplara göre azalmış bulundu (p<0,05). Bu çalışma sonucunda, PNX uygulamasının testis dokusunu torsiyon detorsiyon hasarına karşı koruyucu bir etki gösterdiği belirlendi.

ABSTRACT

Testicular torsion, which is a common clinical condition especially in perinatal and pubertal periods, can cause damage to testicular tissue and infertility. Early diagnosis and intervention are important to minimize the damage to the testicular tissue, which is highly vulnerable to ischemic damage. Phoenixin (PNX) is a peptide known to play a role in reproductive functions. Expressed both centrally in the hypothalamus and nucleus arcuatus and peripherally in cardiac and gastrointestinal tissues, PNX regulates the secretion of reproductive hormones through gonadotropin-releasing hormone. The aim of this study; The effect of PNX on oxidative damage, inflammatory response and serum testosterone level in testicular tissue. In addition, it is aimed to examine the effects of PNX on histopathological changes that may occur in testicular tissues and histopathological features such as seminiferous tubule diameter, epithelial thickness, basement membrane thickness. In the study, 48 male rats were used and the rats were divided into 4 groups (Sham, TTD, TT+PNX+TD, TTD+PNX) (n=12). While sham testicular torsion detorsion surgery will be applied to the rats in the sham group, testicular torsion detorsion surgery will be applied to the rats in the other three groups. A single dose of intraperitoneal PNX (50 µg/kg) was administered to rats in the TT+PNX TD group at the 90th minute of torsion, and at the beginning of detorsion to those in the TTD+PNX group. The rats in the Sham and TTD groups did not receive any injections. After 24 hours of detorsion, rats in all groups were decapitated and blood and testicular tissue samples were taken. Serum testosterone levels from blood samples were determined by ELISA method. SOD, MDA, TAS and TOS levels of tissue samples to determine oxidative damage; TNF-α and IL-6 levels were determined to determine inflammatory damage. In addition, histopathological changes that may occur in testicular tissue after ischemia were examined with routine Periodic Acid Schiff (PAS) staining method and immunohistochemical methods. Within the scope of immunohistochemical analysis, spermatogonium stem cells, Sertoli cells, Leydig cells were stained with specific antibodies, cell counts were made and compared between groups.

It was observed that SOD enzyme activity and TAS level in testicular tissue were significantly decreased in the TTD group compared to the sham group (p<0.05). In addition, a significant increase was observed in MDA, TOS, TNF-α and IL-6 levels due to torsion detorsion damage in testicular tissue (p<0.05). A statistically significant increase in SOD enzyme activity and TAS levels was determined in the PNX-treated groups, independent of the time of application (p<0.05). On the other hand, it was determined that PNX application caused a decrease in MDA, TOS, TNF-α and IL-6 levels, which increased due to torsion detorsion damage (p<0.05). As a result of histomorpholic analysis, seminiferous tubule diameter and epithelial thickness were found to be significantly increased in the PNX-treated groups compared to the TTD group (p<0.05), while they were found to be similar compared to the sham group (p>0.05). The number of spermatogonia was found to be significantly decreased in the TTD group compared to the sham group (p<0.05). While an increase was observed in the PNX applied groups compared to the TTD group (p<0.05), it was found to be similar compared to the sham group (p>0.05). The diameter measurements of the tubules in which spermatogonia were counted were also found to be decreased in the TTD group compared to the other groups, as in the previous seminiferous tubule measurements (p<0.05).

As a result of this study, it was determined that PNX application had a protective effect on testicular tissue against torsion detorsion damage.